蛋白质質含有量による違い

1、ミクロケルダール（固定）窒素定量法ケルダール
濃硫酸とサンプル熱くなっている。窒素は、アンモニア（消化剤）の分解され、アンモニアをさらにアンモニアの役割の硫酸への硫酸塩、有機物質を含む。アルカリのリリースは、アンモニアのアルカリ分解アンモニアの酸蒸気には、蒸気を介して、それを作成し、規定では、この酸とも試料中の窒素含有量を計算するための範囲です。場合、グリシンは、例えば、反応のタイプは以下のとおり：
nh2ch2cooh 3硫酸 - 2co2 3 so2 4 H2Oの+アンモニア（1）
  2nh3 +硫酸 - （nh4）2so4（2）
  （nh4）2so4 2 naoh氏 - 2h2o + na2so4 2アンモニア（3）
反応（1）、（2）ケイ瓶（3）ケルダール蒸留装置を実施の反応を完了します。
ためには、触媒として、k2so4ソリューション沸点を改善するためcuso4追加することができるの消化を高速化する。アンモニアをホウ酸溶液を収集するための強い酸で滴定する場合に使用することができます。と計算方法を実験ここでは省略。
全窒素量は、サンプルのタンパク質のコンテンツを取得するサンプルの計算の結果以外の量のタンパク態窒素を減算する必要があります
窒素派生した。さらには、サンプルのタンパク態窒素6.25を乗じた派生したとされているサンプルの蛋白質のコンテンツを取得してください。
第二に、ビウレット法（ビウレット法）
（）実験の原理
ビウレット（nh3conhconh3）約180℃、尿素の2つの分子を加熱することによって、されている分子のリリース後にアンモニアの製品になる。強アルカリ性溶液では、ビウレットの形成とcuso4紫色の複合体は、ビウレット反応と呼ばれる。ここで2つのアミド基または2つの直接ペプチド結合、または炭素原子がペプチド結合の中央に接続されたリードに接続されており、これらの化合物は、ビウレット反応している。
は、タンパク質含有量を決定するために使用することができる色の紫色の複合体の深さのタンパク質の濃度ではなく、タンパク質分子量やアミノ酸組成に比例して行うことは何もしています。 1の範囲の決定10mgの蛋白質です。素材の決意を妨害されます：硫安、トリスバッファ、および特定のアミノ酸。
この方法の利点は、より色はタンパク質のようなさまざまな色合いだけでなく、素材との干渉が少なく高速です。主な欠点が悪い感度。したがって、ビウレットメソッドは、通常の高速にする必要がで使用されるが、それは蛋白質の非常に正確に決定する必要はありません。
（Bの）試薬および装置
1。試薬：
（1）標準蛋白質溶液：標準的な結晶性ウシ血清アルブミン（BSA）または標準カゼイン、10mg/mlの蛋白質溶液の標準的な準備を使用して、その純度を修正するためa280 0.66の1mg/mlのBSAの濃度を使用することができます。必要に応じて、標準的なタンパク質は、タンパク質の窒素含有のマイクロケルダール決意の純度を計算するためには、事前にすることができますし、その純度によると、標準的な蛋白質溶液の準備を検討中だ。ウシ血清アルブミン、または0.05n naoh氏とH2Oの準備、カゼインの準備に0.9％のNaCl。
（2）ビウレット試薬：水の500 mlの撹拌で300ミリリットル10％NaOH水溶液、水で希釈追加することによって溶解した1.50グラム硫酸銅（cuso4•5h2o）と6.0グラム酒石酸カリウムナトリウム（knac4h4o6•4h2o）を持つ1リットルペットボトル（または内側の壁にパラフィンワックスをボトルでコーティング格納される）する。この試薬の長期保存することができます。もし黒の沈殿物を使用してストレージボトル登場、その後の必要性を再準備。
2。備品：
可視光分光光度計、大規模な管15、渦ミキサーのように。
（℃）する方法
1。標準曲線：水1 mlをし、その後四ミリリットルビウレット試薬の追加を構成する12の試験管2つのグループは、それぞれに0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mlの標準蛋白質溶液に参加に分かれてください。十分540nm部を室温（20〜25℃）で30分下に置かれ、での測色を実施する。洗った後蛋白質溶液の最初のテストに伴って増加していない管の空白を制御ソリューションとして、。水平方向、縦方向は、標準曲線の描画座標の光を吸収する値を座標のタンパク質含有量を二つのグループの平均を取ることを決意。
2、サンプルの測定：2ください〜3 in vitroで、未知サンプルのタンパク質濃度の決定のための同じメソッドを使用して。には、サンプルを10mg/mlの濃度を超えないように注意してください。